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光度計光度簡介

光度定義

分光光度法是在特定波長處或一定波長範圍内光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。常用的波長範圍為:(1)200~400nm的紫外光區(2)400~760nm的可見光區,(3)2.5~25μm(按波數計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準确度,所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定,定期進行校正檢定。

 
儀器組成
分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白
定量以及細菌生長濃度的定量。
儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信号處理器和顯示與存儲系統組成。
 
光譜範圍
包括波長範圍為400~760 nm的可見光區和波長範圍為200~400 nm的紫外光區.不同的光源都有其特有的發射光譜,因此可采用不同的發光體作為儀器的光源.
鎢燈的發射光譜:鎢燈光源所發出的400~760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射後,可得到由紅橙,黃綠,藍靛,紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源.
氫燈(或氘燈)的發射光譜:氫燈能發出185~400 nm波長的光譜可作為紫外光光度計的光源.
物質的吸收光譜(1)
如果在光源和棱鏡之間放上某種物質的溶液,此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現了幾條暗線,即光源發射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收後的光譜稱為該溶液的吸收光譜.
不同物質的吸收光譜是不同的.因此根據吸收光譜,可以鑒别溶液中所含的物質.
物質的吸收光譜(2)
當光線通過某種物質的溶液時透過的光的強度減弱.因為有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被組成此溶液的物質所吸收隻有一部分光可透過溶液.
入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過光
如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失則:
入射光 = 吸收光 十 透過光
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更新日期:2014/8/6 11:26:12